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Accueil > Services > Séquençage NextGen > RNA-SEQ et miRNA

Séquençage d'ARN

Profil miRNA ou smallRNA

IntegraGen a développé un protocole spécifique pour le séquençage de petits ARN.

Notre laboratoire prend en charge la purification des miRNA à partir de 1µg d'ARNtotal, et le séquençage haut-débit sur Illumina HiSeq2000 en 1x36 bases.

Les résultats livrés incluent le clustering des séquences identiques et le comptage associé, et sur demande, la classification des miRNA connus, ARN non codants, 'genomic repeats' et séquences codantes, ainsi que le différentiel d'expression des miRNA entre deux échantillons.

RNA-Seq

IntegraGen propose deux protocoles en fonction de l'objectif du projet et de la qualité de l'ARN de départ:

mRNA-Seq
totalRNA-Seq
  • ARNtotal > 1µg non dégradé (RIN>8)
  • Capture de l'ARNm polyA
  • Fragmentation
  • Synthèse du cDNA
  • Ligation des adaptateurs
  • Séquençage
  • Analyse
  • ARNtotal > 1µg non dégradé (RIN>6)
  • Fragmentation
  • Synthèse du cDNA
  • Ligation des adaptateurs
  • Normalisation DSN *
  • Séquençage
  • Analyse

* La normalisation DSN permet l'élimination des ARN ribosomaux et la normalisation des ARN messagers surexprimés.

Les analyses bio-informatiques incluent:

  • QC extensif des données de séquences
  • Mapping des paires de séquences contre le génome de référence, et détection des jonctions de splice
  • Annotation des gènes et transcrits
  • Calcul du niveau d'expression des gènes et transcrits (FPKM)
  • Expression différentielle par gène/isoforme entre deux conditions

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